Técnica Kato

MÉTODO DE KATO KATZ Ó FROTE GRUESO

1.- INTRODUCCIÓN

Este método fue descrito por Kato y Miura en 1954 y antiguamente se denominaba como; frote grueso fue evaluada por Komiya Kobashi y Martín Beaver, quienes introdujeron la modificación de pasar la materia fecal por una malla para evitar el paso de fibras y restos alimenticios no digeridos, lo que mejoró la técnica original.

Es una técnica muy sencilla en cuanto a materiales y reactivos a utilizar, en cuanto a los cálculos para el reporte de resultados estos no representan mayor problema.

Se usada para diagnosticar helmintiasis y cuantificar el hallazgo de huevos, los resultados nos dan la concentración de huevos por gramos de heces.

2.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN

Este método se fundamenta en la utilización de glicerina como aclarante y el verde de malaquita como colorante de contraste, además de un cubreobjeto de celofán humedecible, que es el vehículo para la solución de Kato. En este apartado se debe considerar que a través de este método no se diagnosticaran protozoosis por el aclaración que produce la glicerina y el verde de malaquita puede enmascarar la finas estructuras de los parásitos unicelulares. Otro dato a tener en cuenta es que cuando se tratan de parasitosis mixtas como geohelmintiasis con himenolepiosis los huevos de estos últimos son delicados y aclaran mas rápido que los de nematelmintos.

3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

  3.1 Reactivos

-Glicerina

-Verde de malaquita

-Agua destilada

  3.2 Equipos de Laboratorio

-Microscopios.

-Estufa de cultivo.

  3.3 Materiales de laboratorio

-Cuadros de malla para mosquitero de 10 cm x lado

-Cuadros de papel celofán de 22 x 40 mm (como portaobjeto)

-Cuadros de cartón de 3 mm de grosor y de 30 mm de lado con una perforación en el centro de 6 mm de diámetro.

-Papel encerado

-Papel absorbente

-Abatelenguas o Aplicadores

-Portaobjetos

4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

1. Depositar sobre el papel encerado 5 grs de materia fecal

2. colocar la malla sobre la materia

3. Presionar la malla para que salga el tamizado.

4. Se efectúa una horadación de 0.6 cm. de diámetro en cartón de cascaron y se coloca sobre un portaobjeto.

5. Dentro del circulo se introduce la muestra de materia fecal (50 mg) .

6. Con sumo cuidado retirar el soporte de papel cascaron o cartón.

7. El excremento quedara en forma cilíndrica.

8. Cubrirlo con un fragmento de celofán (22 x 30 mm) que se encuentra previamente humedecido con glicerina y verde de malaquita 3% durante 24 hrs.

9. Hacer un squash con la ayuda de papel adsorbente, con el propósito de eliminar el exceso de glicerina y de lograr una extensión delgada, apta para la observación.

10. dejar reposar durante 20 ó 30 minutos a 37 grados centígrados para aclaración del material fecal (pero no de los huevos)

11. Examinar al microscopio para su cuantificación.

4.1 Muestreo y muestra

4.1.1 La Obtención de muestra debe ser; expulsión de manera natural

4.1.2 En frasco de boca ancha etiquetados con; nombre

4.2 Preparación del sistema de Medición

4.2.1. Seguir las Instrucciones de limpieza y manejo del microscopio.

4.3 Uso del sistema de Medición (Proceso de lectura y / u observaciones)

4.3.1 Enfocar al microscopio la preparación con objetivo 10 X.

4.3.2. Realizar la lectura de la totalidad de la preparación de manera sistemática.

4.3.3. Reportar según indicaciones en el apartado reporte de resultados.

4.3.4. Terminado el proceso apagar el equipo, limpiar y enrollar perfectamente el cordón.

4.3.5 Desechar los materiales de acuerdo con el procedimiento de desecho estándar

5.- PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

De acuerdo con la formula establecida, calcular la concentración de la sustancia en las unidades respectivas.

5.1 Calculo de resultados

El número de huevos contados en toda la preparación se multiplica por un factor constante de 20;

Si en 50 mg. de la muestra se encontró un huevo, como 1 gr. Tiene 1000 mgs. Se hace una regla de tres y por consiguiente 1000 dividido entre 50 dará un factor de 20, que es el que se utilizará para multiplicar el número de huevos contados en la preparación.

5.2 Reporte de resultados

El resultado se expresa en huevos por gramos de heces (hgh) ó larvas por gramos de heces (lgh)

6.- CONFIABILIDAD ANALÍTICA

6.1 Se debe evitar que el tiempo de aclaración se exceda, pues esto dificulta la observación de los huevos.

7.- CONTROL DE CALIDAD

Solo la práctica de la técnica durante varias veces ayudará a establecer los tiempos específicos para cada espécimen.

8.- PRACTICABILIDAD

8.1 Debe ser un estudiante de Química Clínica, Químico Fármaco biólogo ó Químico Biólogo parasitólogo con supervisado por el facilitador de la Experiencia Educativa.